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網(wǎng)站首頁(yè) ◇ 解決方案 ◇ 原方法回收率低？迪馬科技讓蜂產(chǎn)品雙甲脒檢測(cè)大不同
蜂產(chǎn)品中雙甲脒及其代謝物殘留量的測(cè)定
參考GB 31657.8-2025 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 蜂產(chǎn)品中雙甲脒及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》
雙甲脒是一種常用于畜牧業(yè)和農(nóng)業(yè)的廣譜殺蟲(chóng)劑，通過(guò)干擾蟲(chóng)類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的代謝達(dá)到防治病蟲(chóng)的效果，蜂產(chǎn)品中使用可以達(dá)到防治蜂螨的效果。雙甲脒化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，在生物體內(nèi)易代謝成具有致癌性的2,4-二 jia ji ben an，對(duì)人體健康造成威脅。GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥zui da 殘留can liu 》規(guī)定牛、羊、豬及蜂蜜中的xian liang為0.4mg/kg, 并將雙甲脒及其代謝產(chǎn)物 2,4-二 jia ji ben an的總和作為殘留標(biāo)志物。
GB 31657.8-2025 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 蜂產(chǎn)品中雙甲脒及其代謝物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》是由中華人民共和國(guó)nong ye nong cun 部 、guo jia 衛(wèi)生健康委員會(huì)和國(guó)家市場(chǎng)jian du guan 理總局三大部委聯(lián)合發(fā)布的重要技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)已于2025年6月3日發(fā)布，并定于2025年9月1日起正式實(shí)施。本方法使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行測(cè)定，具有更高的靈敏度和更低的檢出限。
迪馬科技參考GB 31657.8-2025重現(xiàn)了此方法，使用磷酸二氫鉀緩沖液溶解樣品，乙腈提取，使用我司色譜柱Leapsil® C18，100x4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)進(jìn)行測(cè)定，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行計(jì)算，添加水平為5μg/kg的蜂蜜樣品加標(biāo)回收率可做到雙甲脒51%-63%，2,4-二 jia ji ben an 80%-86%；添加水平為10μg/kg的蜂王漿樣品加標(biāo)回收率可做到雙甲脒60%-72%，2,4-二 jia ji ben an 65%-73%。
經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)測(cè)試，原方法重現(xiàn)性較差，且回收率偏低。我司對(duì)緩沖鹽的使用進(jìn)行了優(yōu)化，使用弱堿性的磷酸氫二鉀緩沖液代替磷酸二氫鉀后，減弱了前處理過(guò)程中雙甲脒的代謝速率，降低了由于大量代謝中間產(chǎn)物反應(yīng)不che di造成的回收率損失，有利于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)，更容易達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)中批內(nèi)樣品相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤20%的要求。使用0.2mol/L磷酸氫二鉀作為緩沖液后，回收率普遍提升了30%左右，大大降低了假陰性風(fēng)險(xiǎn)，增加了定量分析的準(zhǔn)確性。
由于原方法做蜂王漿樣品有強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，我司增加了凈化步驟，經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)，使用我司ProElut® PMR 150mg/3mL(Cat.#: 65996)對(duì)樣品提取液凈化后，對(duì)目標(biāo)物不產(chǎn)生吸附的同時(shí)，蜂王漿樣品可由強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)降低為中等基質(zhì)效應(yīng)，減少了樣品對(duì)離子源的污染并增加了儀器使用壽命，該凈化方法簡(jiǎn)單、快捷，客戶(hù)可根據(jù)實(shí)際需求選擇使用。
本方案適用蜂蜜和蜂王漿雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an的測(cè)定。
(1) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：由迪馬科技標(biāo)準(zhǔn)品部提供(Cat.#: 48872)，濃度為100μg/mL溶于乙腈。
(2) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標(biāo)準(zhǔn)中間液Ⅰ：準(zhǔn)確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用50%乙腈水配制成標(biāo)準(zhǔn)中間液Ⅰ，濃度為5.0μg/mL。
(3) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標(biāo)準(zhǔn)中間液Ⅱ：準(zhǔn)確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標(biāo)準(zhǔn)中間液Ⅰ，用50%乙腈水配制成標(biāo)準(zhǔn)中間液Ⅱ，濃度為125ng/mL。
(4) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標(biāo)準(zhǔn)中間液Ⅲ：準(zhǔn)確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用50%乙腈水配制成標(biāo)準(zhǔn)中間液Ⅲ，濃度為1.0μg/mL。
(5) 雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標(biāo)準(zhǔn)中間液Ⅳ：準(zhǔn)確吸取適量雙甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合標(biāo)準(zhǔn)中間液Ⅲ，用50%乙腈水配制成標(biāo)準(zhǔn)中間液Ⅳ，濃度為25ng/mL。
蜂蜜：
(1) 稱(chēng)取5g樣品于50mL塑料離心管中；
(2) 向離心管中加入5mL 0.2mol/L磷酸氫二鉀溶液；
(3) 向離心管中加入5mL乙腈，振蕩5min；
(4) 向離心管中加入5g氯化鈉和5g無(wú)水硫酸鎂，立即搖勻，振蕩5min；
(5) 冷水浴5min；
(6) 8000rmp離心5min；
(7) 移取上清液至另一個(gè)離心管中待凈化。
蜂王漿：
(1) 稱(chēng)取2g樣品于50mL塑料離心管中；
(2) 向離心管中加入2mL 0.2mol/L磷酸氫二鉀溶液；
(3) 向離心管中加入10mL乙腈，振蕩5min；
(4) 向離心管中加入3g氯化鈉和3g無(wú)水硫酸鎂，立即搖勻，振蕩5min；
(5) 冷水浴5min；
(6) 8000rmp離心5min；
(7) 移取上清液至另一個(gè)離心管中待凈化。
ProElut® PMR 150mg/3mL (Cat.#: 65996)
樣品：準(zhǔn)確吸取2mL待凈化液于PMR小柱，接收流出液，吸取流出液0.5mL于2mL玻璃進(jìn)樣瓶(Cat.#: 1033)，加入0.5mL水，混勻，經(jīng)0.22μm PTFE濾膜過(guò)濾(Cat.#: 37178)，待測(cè)定。
基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作液： 準(zhǔn)確吸取2mL空白樣品待凈化液于PMR小柱，接收流出液，吸取流出液0.5mL于2mL玻璃進(jìn)樣瓶(Cat.#: 1033)，加入適量標(biāo)準(zhǔn)中間液，用水定容至1mL，混勻，經(jīng)0.22μm PTFE濾膜過(guò)濾(Cat.#: 37178)，待測(cè)定。
UPLC條件
色譜柱：Leapsil® C18，100 x 4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)
流速：0.3mL/min
進(jìn)樣量：10μL
柱溫：35℃
流動(dòng)相：A:0.1%甲酸水溶液 B:甲醇
質(zhì)譜條件
電離模式: ESI
掃描方式: 正離子掃描
檢測(cè)方式: 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)
電噴霧電壓: 4500V
霧化氣壓力: 50psi
輔助氣壓力: 50psi
氣簾氣壓力: 20psi
離子源溫度: 500℃
1. 液相條件為反向條件下，2,4-二 jia ji ben an 在普通C18色譜柱上保留很弱，在50%乙腈水的溶劑條件下，洗脫能力太強(qiáng)，容易有溶劑效應(yīng)，經(jīng)過(guò)測(cè)試，使用我司色譜柱Leapsil® C18，100 x 4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對(duì)目標(biāo)物有較好的保留，并且能消除溶劑效應(yīng)。
2. 蜂王漿樣品除了比蜂蜜樣品有更強(qiáng)的基質(zhì)影響，在進(jìn)樣過(guò)程中，還有更快的代謝速率。代謝速率測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，蜂王漿在等待進(jìn)樣過(guò)程中，每過(guò)1小時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生2%的代謝物，蜂蜜產(chǎn)生0.5%的代謝物，建議自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)置低溫，降低雙甲脒代謝速率。
3. 本方法在原方法基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化，使用磷酸氫二鉀替換了磷酸二氫鉀，降低了代謝中間產(chǎn)物的不穩(wěn)定性，提升了回收率，加標(biāo)回收結(jié)果的重現(xiàn)性更好。
4. ProElut® PMR凈化小柱對(duì)樣品中的脂類(lèi)有很強(qiáng)的選擇性吸附，同時(shí)不吸附目標(biāo)物。兩種添加水平的蜂王漿樣品的基質(zhì)效應(yīng)從24.8%、16.4%分別提升到55.6%、40.4%，除了降低基質(zhì)效應(yīng)的效果非常明顯，上樣后，小柱上也殘留有色雜質(zhì)，見(jiàn)下圖：
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